ABSTRACT
Molecular characterization of one stable strain of Trypanosoma cruzi, the 21 SF, representative of the pattern of strains isolated from the endemic area of Säo Felipe, State of Bahia, Brazil, maintained for 15 years in laboratory by serial passages in mice and classified as biodeme Type II and zymodene 2 has been investigated. The kinetoplast DNA (kDNA) of parental strain, 5 clones and 14 subclones were analyzed. Schizodeme was established by comparative study of the fragments obtained from digestion of the 330-bp fragments amplified by polymerase chain reation (PCR) from the variable regions of the minicicles, and digested by restriction endonucleases Rsa I and Hinf I. Our results show a high percentual of similarity between the restriction fragment lenght plymorphism (RFLP) for the parental strain and its clones and among these individual clones and their subclones at a level of 80 to 100 per cent. This homology indicates a predominance of the same "principal clone" in the 21SF strain and confirms the homogeneity previously observed at biological and isozymic analysis. These results suggest the possibility that the T. cruzi strains with similar biological and isoenzymic patterns, circulating in this endemic area, are representative of one dominant clone.
Subject(s)
Animals , DNA, Kinetoplast/genetics , Polymerase Chain Reaction , Trypanosoma cruzi/genetics , Brazil , Clone Cells/parasitologyABSTRACT
A cepa 21 SF, do Trypanosoma cruzi, oriunda de área endêmica de São Felipe-Bahia, de biodema II e zimodema 2, mantida em laboratório por 15 anos com características estáveis, foi clonada neste trabalho, por isolamento de um parasita, obtendo-se cinco clones que, subclonados, deram origem a 14 subclones. Cada clone ou subclone sofreu quatro passagens sucessivas em camundongos Suíços. A quinta passagem foi utilizada para o estudo biomorfológico e preparação de culturas para análises isoenzimática e do kDNA do T. cruzi. As isoenzimas analisadas foram: Fosfoglicomutase, Glicose Fosfato Isomerase, Alanina Aminotransferase e Aspartato Aminotranferase. O kDNA foi analisado pelo estudo comparativo dos RFLP (Restriction Fragments Lenght Po/ymorphism), resultantes da digestão, por endonucleases de restrição, do DNA amplificado da região variável do minicírculo. Os resultados obtidos evidenciaram similaridade dos caracteres biológicos representados por: a) curvas parasitêmicas com infecção inicial a partir do 7Q dia e piques irregulares entre o 12Q e o 20Q dia da infecção, característicos de cepas com biodema li; b) morfologia dos tripomastigotas sanguícolas, com predomínio de formas delgadas no 7Q dia da infecção e das formas largas no 10Q e 14Q dias desse processo; c) índices de mortalidade dos animais infectados, variando de acordo com a virulência das amostras. A caracterização isoenzimática evidenciou identidade entre o perfil zimodêmico da cepa e os perfis dos vários clones e subclones. O estudo comparativo dos RFLP apresentou percentuais de homologia variando de 67 a 100% entre a cepa e os clones, 76 a 97% entre os diversos clones e 79 a 100% entre os clones e os seus subclones. A análise conjunta de todos os aspectos sugere a predominância de clones na cepa 21 SF, responsáveis pela manutenção da estabilidade dos seus caracteres.
Subject(s)
Animals , Mice , Chagas Disease/parasitology , Pathology , Trypanosoma cruzi/parasitologyABSTRACT
Com o objetivo de investigar os níveis respiratórios do tomateiro, através de medidas de consumo de oxigênio nos seus diversos orgãos, foi realizado um experimento com material cultivado. Efetuando medidas polarográficas de amostras dos vários órgãos, obgervou-se que há, basicamente, tres níveis de consumo de oxigênio no vegetal estudado: níveis baixos de consumo de oxigênio, no limbo e na flor; níveis médios de consumo de oxigênio em raiz, caule e pecíolo; e níveís altos de consumo de oxigênio apresentados pelos frutos verde, de vez e maduro. Os aspectos de maior destaque, relacionados com os coeficientes respiratórios, foram os seguintes: a) o mais baixo nível de consumo de oxigênio em todo o vegetal estudado ocorreu no limbo, o qual pode ser explicado pela provável existência de uma açao cooperativa entre cloroplastos e mitocôndrias, para a produção de ATP; e b) os altos níveis respiratórios dos frutos que são explicados, talvez, pela ocorrência do climatério. Os níveis de consumo de oxigênio nos frutos atingiram seu ponto máximo no fruto de vez, indicando que o fenômeno do climatério está relacionado com todo o processo de amadurecimento do fruto e não somente restrito aos frutos maduros. A introdução de a-cetoglutarato e succinato nas soluções mitocondriais provocou, na maioria das vezes, diminuição no consumo de oxigênio endógeno. Esta ocorrência deve ser mais investigada.